Marqueur fluorescent en PCR
De nombreux marqueurs fluorescents sont utilisés en PCR (réaction en chaîne par polymérase).
Historique modifier
Par souci de clarté, les dates correspondent à la première publication sur le domaine et seuls les premiers auteurs sont cités, les références complètes étant dans le chapitre "bibliographie".
- 1880 : Premier milieu de culture synthétique pour micro-organismes fluorescents par Hueppe F.
- 1964 : Détection par fluorescence de l’ADN associé au BET par Lepecq JB.
- 1972 : Première migration d’ADN sur gel d’électrophorèse par Aaij C.
- 1986 : Première publication publique sur la PCR par Kary Mullis (prix Nobel de chimie en 1993).
- 1989 : Première détection de produit de PCR à l’aide du BET (et non par la radioactivité) par Xu ZD.
- 1992 : Invention de la PCR en temps réel par Higuchi R.
- 1994 : Dépôt de brevet du SYBR Green I par Molecular Probes.
- 1995 : Premier emploi du SYBR green pour détecter un produit de PCR par Schneeberger C.
- 1995 : Invention des sondes d’hydrolyses par Livak KJ.
Les marqueurs aspécifiques modifier
Les intercalants de l'ADN modifier
Les marqueurs du petit sillon modifier
Les cyanhydrines asymétriques modifier
Les marqueurs séquences spécifiques modifier
Les sondes d'hybridation modifier
Les sondes d'hydrolyses modifier
La sonde est construite à l'aide d'un donneur (la fluorescéine dont la longueur d'onde d'excitation est à 530 nm) et d'un "quencheur", greffés sur un polynucléotide complémentaire de la séquence d'ADN d'intérêt.
Les sondes Molecular Beacons modifier
Les sondes Scorpions modifier
Bibliographie modifier
Bibliographie francophone modifier
- Hueppe F. Etudes sur le lait blue. Cohn's Beiträge zur Biologie der Pflanzen. 1880;3
- Lepecq JB, Yot P, Paoletti C. Interaction entre le bromhydrate d’ethidium (BET) et les acides nucléiques (AN). Etude spectrofluorométrique. [Interaction of ethidium bromhydrate (BET) with nucleic acids (NA). Spectrofluorimetric study.] C R Hebd Seances Acad Sci. 1964;259:1786-9.
- Poitras E, Houde A. La PCR en temps réel: principes et applications. Reviews in Biology and Biotechnology (Canada). 2002;2(2):2-11
- Tsé C, Capeau J. Quantification des acides nucléiques par PCR quantitative en temps réel. Ann Biol Clin (Paris). 2003;61(3):279–93
Bibliographie anglophone modifier
- Aaij C, Borst P. The gel electrophoresis of DNA. 1972. Biochim Biophys Acta. May 10;269(2):192-200.
- Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith R. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. 1992. Biotechnology;10:413–7.
- Livak KJ, Flood JA, Marmaro J, Giusti W, Deetz K. Oligonucleotides with fluorescent dyes at opposite ends provide a quenched probe system useful for detecting PCR product and nucleic acid hybridization. 1995. PCR Methods Appl. 4:357–362.
- Mullis K, Faloona F, Scharf S, Saiki R, Horn G, Erlich H. Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction. Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 1986;51 Pt 1:263-73.
- Schneeberger C, Speiser P, Kury F, Zeillinger R. Quantitative detection of reverse transcriptase-PCR products by means of a novel and sensitive DNA stain. 1995. PCR Methods Appl. Feb;4(4):234-8.
- Xu ZD, Yu YJ, Hsie AW, Caskey CT, Rossiter B, Gibbs RA. Deletion screening at the hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase locus in Chinese hamster cells using the polymerase chain reaction. 1989. Teratog Carcinog Mutagen; 9(3):177-87.
